Immunohistochemical studies on duodenum, spleen and liver in mice: distribution of ferroportin and prohepcidin in an inflammation model / Estudios inmunohistoquímicos en duodeno, bazo e hígado de ratón: distribución de ferroportina y prohepcidina en un modelo de inflamación

Duodenum, spleen and liver have a crucial role in iron balance on the whole organism and are the major sites of Ferroportin (FPN) expression. Specific regulations between FPN and hepcidin are responsible for changes seen in physiopathological conditions such as inflammation. We studied in vivo effects of turpentine oil-induced acute inflammation on FPN expression, and its relation with prohepcidin and iron mobilization. Immunohistochemical procedures were performed using rabbit anti-mouse FPN and prohepcidin antibodies with goat-labeled polymer-HRP anti-rabbit (DAB) as secondary antibody. Plasma and tissular iron were also studied. Our results showed a notable expression and redistribution of duodenal FPN to basolateral membrane in turpentine-treated mice, compared with supranuclear and the weak basolateral expression observed in healthy mice. Red pulp macrophages of healthy mice showed FPN-hemosiderin co-localization, compared with turpentine-treated mice which showed lack of FPN. In liver of healthy mice, FPN was seen in Kupffer cells, whereas in turpentine-treated mice decreased. In addition, we observed an increment of hepatic pro-hepcidin with a significant hypoferremia. Our findings demonstrated that acute inflammation induced a differential distribution of FPN, showing a cell type specific response. In macrophages, increased hepatic prohepcidin induced degradation of FPN, resulting in hypoferremia. In enterocytes, the redistribution observed of duodenal FPN reflects a different regulation in this tissue. The observed response of the proteins studied may be part of a cyclical pattern of systemic effects of acute inflammation on mouse tissue.

El duodeno, bazo e hígado desempeñan un rol clave en el balance de Fe del organismo y son los mayores sitios de expresión de ferroportina (FPN). Regulaciones específicas entre FPN y hepcidina son las responsables de los cambios observados en condiciones fisiopatológicas como la inflamación. Nuestro objetivo fue estudiar los efectos in vivo de la inflamación aguda inducida con turpentina sobre la expresión de FPN y su relación con prohepcidina y la movilización de hierro. Los procedimientos inmunohistoquímicos fueron desarrollados utilizando anticuerpos anti FPN y prohepcidina de ratón, desarrollados en conejo y un polímero conjugado con anticuerpos secundarios anti conejo desarrollado en cabra (HRP-DAB). Se evaluaron los niveles de Fe plasmático y tisular. Nuestros resultados mostraron una clara expresión y redistribución de FPN duodenal hacia la membrana basolateral en ratones tratados con turpentina, con respecto a la expresión perinuclear y leve expresión basolateral observada en ratón sano. Macrófagos de la pulpa roja esplénica mostraron co-localización de FPN y hemosiderina, comparado con la ausencia de expresión en ratón tratado con turpentina. En hígado de ratón sano, se observó expresión de FPN en células de Kupffer, mientras que en ratón tratado con turpentina la expresión fue menos evidente. Además, observamos un aumento en la expresión de prohepcidina hepática con una hipoferremia significativa. Nuestros resultados demostraron que la inflamación aguda indujo una distribución diferencial de FPN, mostrando una respuesta específica del tipo celular. En macrófagos, el aumento de prohepcidina hepática indujo degradación de FPN, resultando en hipoferremia. En enterocitos, la redistribución observada de FPN duodenal, refleja una regulación diferente en este tejido. La respuesta observada de las proteínas estudiadas podría ser parte de un patrón cíclico de efectos sistémicos de la inflamación aguda en tejidos murinos.

Eritropoyesis y esplenectomía en un modelo murino / ERITHROPOIESIS AND SPLENECTOMY IN A MURINE MODEL

Introducción: El bazo del ratón adulto participa en la recuperación del eritrón porque su estroma aporta un microentorno adecuado para la proliferación y maduración de progenitores. Objetivo: Evaluar por estudios morfológicos el grado de eritropoyesis hepática y renal en ratones esplenectomizados en respuesta a la hemólisis inducida por fenilhidrazina (FHZ). Materiales y Métodos: Ratones hembra CF1(30±3g) fueron agrupados en:1)GRUPO CONTROL (GC)(n=18): solución fisiológica (SF) intraperitoneal (ip) (300µL;días:0,2) postcirugía simulada; 2)GRUPO ANÉMICO (GA) (n=18): FHZ ip (60mg/Kg/ 300mL;días:0,2) postcirugía simulada;3)GRUPO ESPLENECTOMIZADO NO ANÉMICO(GENA) (n=18): SF ip postesplenectomía (300mL;días:0,2); 4) GRUPO ESPLENECTOMIZADO ANÉMICO (GEA)(n=18): FHZ ip (60mg/Kg/ 300mL;días:0,2) postesplenectomía. Sangre venosa: cada 2 días hasta el día 10 (n=3). Parámetros evaluados: Hb, HCT, reticulocitos y cuerpos de Heinz. La esplenectomía se realizó bajo anestesia. Los tejidos fueron fijados con Bouin y Formol 10% y procesados para Hematoxilina- Eosina. Islotes eritropoyéticos (IE) semicuantificados por un escore preestablecido. Resultados: Los grupos anémicos, con y sin bazo, mostraron hemólisis franca el día 4. La recuperación de la anemia fue el día 6 en el GA y el día 10 en el GEA. Reticulocitosis máxima: día 8 en el GEA y día 6 en el GA. Cuerpos de Heinz: elevados hasta el día 6 en GA y hasta el día 8 en GEA. Se observaron abundantes IE en hígado y en menor grado en riñón. Conclusiones: La recuperación eritropoyética en ratones esplenectomizados fue asumida principalmente por el hígado. La restauración tardía evidenció que el bazo es el órgano que compensa con mayor eficiencia la crisis hemolítica en esta cepa de ratones.

Introduction: The spleen of the adult mouse takes part in the recovery of erythron because its stroma provides a micro-environment that is adequate for progenitor proliferation and maturing. Objective: To assess, by means of morphological studies, the degree of hepatic and renal erythropoiesis in splenectomized mice in response to phenylhydrazine (PHZ)-induced hemolysis. Materials and Methods: Female mice CF1(30±3g) were grouped into: 1) CONTROL GROUP (CG) (n=18): intraperitoneal (ip) physiological solution (PS) (300 µL; days: 0,2) post simulated surgery; 2) ANEMIC GROUP (AG) (n=18): ip PHZ (60 mg / Kg / 300mL; days: 0, 2) post simulated surgery; 3) SPLENECTOMIZED NON- ANEMIC GROUP (SNAG) (n=18): ip PS postsplenectomy (300mL; days: 0, 2); 4) SPLENECTOMIZED ANEMIC GROUP (SAG) (n=18): ip PHZ (60 mg / Kg / 300 mL; days: 0, 2) post-splenectomy. Venous blood: every 2 days until day 10 (n=3). Parameters assessed: Hb, HCT, reticulocytes, and Heinz bodies. The splenectomy was performed under anesthesia. Tissues were fixed using Bouin and 10% Formalin and processed for Hematoxilin- Eosin. Erythropoietic Islands (EI) were semi-quantified by a pre-established score. Results: Anemic groups, with and without the spleen, showed marked hemolysis on day 4. Anemia recovery took place on day 6 in the AG and on day 10 in the SAG. Maximum Reticulocytosis: day 8 in the SAG and day 6 in the AG. Heinz Bodies were high until day 6 in AG and until day 8 in SAG. Abundant EI were observed in the liver and in a smaller degree in the kidney. Conclusions: Erythropoietic recovery in splenectomized mice was mainly assumed by the liver. Late restoration showed that the spleen is the organ that most efficiently compensates the hemolytic crisis in this mice strain.

Analisis multiparametricos para el diagnostico de la anemia ferropriva / Multiparametric analysis for the diagnosis of deficiency anemia

Se evaluó al receptor de transferrina (RsT) como marcador de hierro funcional en dos grupos: 1) controles (50 adultos sanos de ambos sexos residentes a nivel del mar); 2) 50 anémicos ferroprivos por alteraciones nutricionales, gastrointestinales o ginecológicas (AFP). El valor medio en los controles fue 16.6 nmol/l (8.8 a 26.2 nmol/l), sin diferencias significativas por edad y sexo. En el grupo AFP, el valor medio fue 66.3 nmol/l (16.1 a 148.4 nmol/l). El análisis estadístico (características del operador receptor, ROC) estableció un intervalo de referencia óptimo de 8.8 a 25.8 nmol/l, Los valores predictivos, positivo (VPP) y negativo (VPN), del RsT como prueba diagnóstica fueron 97.5 y 97.7 por ciento, respectivamente, y la eficiencia diagnóstica (ED) fue 97.7 por ciento. Tanto en los controles como en los AFP se observó: 1) concentraciones inversas entre el RsT y la ferritina (F) (tendencia potencial entre las variables (p<0.001) con un coeficiente de determinación del 72 por ciento); 2) ampilas variaciones del RsT para concentraciones de hemoglobina (Hb) inferiores a 100 g/l (tendencia exponencial (p < 0.001) con un coeficiente de determinación del 71 por ciento); 3) valores de la relación RsT/log ferritina (índice RsT/F) sensiblemente mayores en AFP (75.8) que en los controles (9.6). La administración de hierro normalizó los niveles del RsT en pacientes ferroprivos, sin cambiar significativamente las concentraciones de ferritina sérica. Nuestros estudios demuestran que el RsT mide con alta especificidad y sensibilidad el hierro funcional.